Propriedades imunomoduladoras dos extratos de viscum

Os efeitos dos extratos de viscum em células imunocompetentes do sistema imunológico não específico e específico,  como células NK, monócitos, macrófagos, células apresentadoras de antígenos, linfócitos T (células T), incluindo células T auxiliares, granulócitos neutrófilos e eosinofílicos, celulars dendrítcas e uma série de citocinas, estão claramente documentados hoje.

Originalmente, acreditava-se que a lectina I do viscum (ML I) era responsável pelas várias reações imunológicas, mas hoje sabe-se que, além de outras lectinas do viscum, como a ML III e a ML de ligação à quitina, outros constituintes, como viscotoxinas, oligo e polissacarídeos, também têm um efeito imunomodulador [175, 194, 195, 211, 212].

A ativação do sistema imunológico não específico após injeção subcutânea causa uma reação de fase aguda com aumento de neutrófilos e ativação do sistema imunológico específico e é caracterizada pela produção de anticorpos contra constituintes do viscum (ativação de células B), aumento do número de células T auxiliares e aumento de eosinófilos no sangue.

As célulars dendríticas são potentes células apresentadoras de antígenos. Elas transmitem as informações obtidas dos dendritos para os linfócitos T e B e os ativam. Experimentos in vitro mostraram que extratos de viscum contendo ML podem acelerar a maturação de células dendríticas e neutralizar o efeito imunossupressor dos sinais de células tumorais nas células dendríticas [213].

A ativação de células do sistema imunológico não específico, como células NK, macrófagos e granulócitos, por extratos de viscum por meio de uma reação de fase aguda já foi bem documentada por vários estudos in vitro e in vivo. Da mesma forma, um aumento em citocinas pró-inflamatórias, como o fator de necrose tumoral (TNF-alfa), IL-1 ou IL-6, foi observado sob exposição a extratos de viscum tanto in vitro quanto em pacientes com tumor, bem como em voluntários saudáveis, tanto para extratos ricos em lectina quanto pobres em lectina ou ricos em viscotoxinas [211, 214, 215, 216].

Em um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo, com 47 voluntários saudáveis que receberam Iscador Qu especial (rico em lectina de viscum), Iscador P (pobre em lectina de viscum) ou placebo (solução salina fisiológica) por 12 semanas, foi demonstrado que a administração de extrato rico em lectina de viscum aumentou significativamente a produção do fator estimulador de colônias de granulócitos/macrófagos pelas células mononucleares do sangue periférico [215]. O fator estimulador de colônias de granulócitos/macrófagos é responsável pela maturação, recrutamento e ativação de células precursoras de granulócitos e monócitos da medula óssea e é um fator importante para a liberação de granulócitos eosinófilos da medula óssea [217].

Portanto, o aumento da liberação de fator estimulador de colônias de granulócitos/macrófagos poderia explicar tanto a ativação de células do sistema imunológico não específico quanto o aumento de leucócitos (especialmente neutrófilos) e granulócitos eosinófilos observados durante a terapia [211, 212]. Há também indícios de que a administração de extratos de viscum previne a supressão pós-operatória de granulócitos e células NK [218, 219].

O sistema monócito/macrófago pode ser ativado direta e indiretamente por vários agentes do viscum (extratos totais, lectinas isoladas do viscum, peptídeos de Kuttan, oligossacarídeos, polissacarídeos) de diferentes maneiras. As funções de apresentação de antígenos são estimuladas, as moléculas coestimuladoras são expressas mais fortemente, enquanto a atividade de fagocitose e a citotoxicidade são aumentadas. Além disso, as citocinas são induzidas e a eficácia antitumoral dos macrófagos/monócitos é aumentada [220].

Várias investigações mostraram que as lectinas do viscum se ligam preferencialmente a monócitos/macrófagos. A ligação causa um aumento no cálcio intracelular e estimula a síntese e liberação de citocinas (TNF-α, IL-1α, IL-1β, IL-6) tanto por lectinas isoladas quanto por cadeias A e B isoladas [221]. Quando os macrófagos foram incubados com lectinas de viscum, foi registrado um aumento dependente da dose em sua capacidade de fagocitose [202].

Os efeitos antitumorais dos extratos de viscum têm sido frequentemente observados em conexão com um aumento no número de monócitos/macrófagos. Uma única administração de macrófagos ativados pelo extrato de viscum foi suficiente para induzir efeitos antitumorais em modelos animais [175].

Além disso, a transferência de macrófagos ativados in vivo de camundongos saudáveis ​​para animais portadores de tumor dobrou o tempo de sobrevivência dos camundongos portadores de tumor. Este efeito não pôde ser alcançado com macrófagos não ativados [202]. Também se supõe que o efeito antiangiogênico dos extratos de viscum seja causado pela liberação de TNF-α dos macrófagos [175].

Extratos de viscum podem ativar diretamente granulócitos in vitro. Aqui, as viscotoxinas provaram ser particularmente eficazes ao aumentar significativamente a fagocitose e a explosão oxidativa em granulócitos humanos. Todas as viscotoxinas e também vários extratos totais de viscum foram eficazes dessa maneira, mas não as lectinas isoladas de viscum.

Extratos de viscum livres de viscotoxinas também podem ativar significativamente os granulócitos (explosão oxidativa e fagocitose). Quando os granulócitos foram incubados com extratos de viscum e viscotoxinas, ocorreu um aumento aditivo na ativação dos granulócitos, com duas rotas diferentes de ativação dos granulócitos parecendo possíveis: por um lado, os granulócitos parecem ser ativados pelo extrato de viscum independentemente das viscotoxinas ou lectinas do viscum. Entretanto, outra via de ativação parece ser induzida pelo extrato total de viscum e viscotoxina [175, 202, 222].

O efeito imunomodulador dos constituintes do viscum (extratos totais, polissacarídeos, lectinas, peptídeos de Kuttan, viscotoxinas) também é caracterizado por um aumento no número e na atividade das células NK, que podem matar seus alvos, como células tumorais, células infectadas por vírus ou microrganismos, liberando substâncias citotóxicas e induzindo a apoptose.

As células NK ativadas por viscum também mostram um efeito antitumoral mais forte do que as células NK não ativadas por viscum em experimentos com animais [175, 202, 223]. Por exemplo, em um experimento com camundongos injetados com células de melanoma, uma forte diminuição na metástase foi observada em animais que foram injetados com células de baço ativadas in vivo de camundongos saudáveis ​​tratados com viscum quatro horas após a injeção de células tumorais. Além disso, seu tempo de sobrevivência aumentou significativamente [224].

Além disso, o mesmo grupo de pesquisadores conseguiu demonstrar que células do baço ativadas com extrato de viscum in vitro reduziram significativamente a metástase e prolongaram o tempo de sobrevivência dos camundongos. Em contraste, a administração de células do baço normais, não ativados pelo viscum, não teve efeito [224, 225, 226].

Constituintes individuais do viscum também têm efeito sobre as células NK in vitro. Por exemplo, o polissacarídeo ramnogalacturonano isolado da planta viscum levou a um aumento na citotoxicidade das células NK por meio de uma ligação de ponte específica entre células efetoras e células tumorais.

Da mesma forma, os oligossacarídeos aumentaram indiretamente a citotoxicidade das células NK CD56+ ao liberar linfocinas [202].

Em uma concentração não citotóxica, as viscotoxinas isoladas também levaram a um aumento significativo na citotoxicidade das células NK em comparação com várias linhas de células tumorais, embora o mecanismo ainda não tenha sido explicado [227].

Em contraste com os outros constituintes do viscum, as propriedades citotóxicas das lectinas isoladas do viscum predominam contra subpopulações de linfócitos individuais. Assim, em uma análise dos subconjuntos de linfócitos após 72 horas de incubação, uma diminuição seletiva significativa na fração de células NK (CD16+ / CD56+ CD3) foi observada em cultura de células já em uma concentração de lectina de viscum de 1 ng/ml na sequência ML III > ML II > ML I (ML = mistletoe lectin, lectina do viscum). Dentro dos outros subconjuntos de células T, entretanto, nenhuma alteração significativa ocorreu. Da mesma forma, a proporção entre células T e B permaneceu a mesma. A morte preferencial de células NK pode ser completamente suprimida pelo soro antilectina do viscum.

Assim, entre as células linfoides, as células NK parecem ser uma população particularmente sensível à lectina do viscum [228]. IEm um estudo envolvendo 40 pacientes com carcinoma de mama ou colorretal operável, foi investigado o efeito da terapia com viscum no número absoluto de células NK e sua atividade contra células K562 e células tumorais do próprio paciente. O estudo também examinou se havia correlação com o curso clínico e a qualidade de vida dos pacientes. O número absoluto de células NK no sangue periférico aumentou. Pacientes sem progressão apresentaram atividade de células NK significativamente maior contra células K562 do que pacientes com progressão. Dentro do grupo com progressão, apenas os pacientes com estágio IV apresentaram função celular reduzida. A atividade das células NK contra as células K562 não estava relacionada ao número de células NK, mas foi encontrada uma correlação negativa entre a atividade das células NK e a progressão do tumor. Não foi encontrada correlação entre a função das células NK e o curso clínico ou qualidade de vida [229].

Produção de anticorpos específicos para extrato de viscum e proliferação de linfócitos

Já no final da década de 1980 foi possível demonstrar que voluntários que receberam uma injeção subcutânea de extrato de viscum formaram anticorpos contra ML I [230] (ML = mistletoe lectin, lectina do viscum), uma vez que a injeção de extratos de viscum confronta o sistema imunológico com antígenos estranhos.

Também foi demonstrado que a terapia com extratos de viscum leva a uma proliferação específica de linfócitos, ou seja, tanto o sistema imunológico humoral quanto o celular são ativados. Esta indução de uma resposta imune específica foi inicialmente atribuída principalmente à ML I. No entanto, sabe-se agora que a ML II, a ML III ou as viscotoxinas também podem estimular a proliferação de linfócitos e a formação de anticorpos [212, 231, 232].

Esses anticorpos ocorrem em pacientes com tumor sob terapia com viscum e também em voluntários saudáveis que foram tratados com extratos de viscum por um longo período de tempo. Os anticorpos são predominantemente do isótipo IgG (IgG1 e IgG3), mas os anticorpos anti-ML I e anti-ML III podem, em casos raros, também ser do tipo IgE [211, 212, 215, 231]. 

Anos mais tarde, outra lectina, a chamada lectina do viscum que se liga à quitina (cbML), foi identificada a partir de extratos de viscum. Anticorpos pertencentes somente à classe IgG também são induzidos contra essa lectina durante a terapia com viscum em pacientes com tumor e voluntários saudáveis.

Um aumento na proliferação também pode ser observado ao incubar linfócitos com cbML in vitro. Uma observação interessante foi que anticorpos contra cbML também puderam ser detectados em indivíduos que nunca tiveram contato com extratos de viscum. Isso contrasta com as reações imunológicas ao ML I, ML III ou viscotoxinas que foram detectadas apenas em indivíduos que tiveram contato com extratos de viscum. Provavelmente as reações cruzadas são responsáveis por isso [211, 212, 233].

As células dendríticas são as células apresentadoras de antígenos mais importantes do sistema imunológico humano, construindo uma ponte entre o sistema imunológico não específico e o específico. Elas desempenham um papel importante no gerenciamento de doenças tumorais e são produzidas a partir de monócitos ou de células precursoras mieloides [234, 235].

Estudos in vitro com células sanguíneas humanas demonstraram que os extratos de viscum contendo lectina do viscum (mistletoe lectin ou ML) podem acelerar a maturação das células dendríticas [236] e que os linfócitos co-incubados com células dendríticas foram estimulados por eles [234].

Além disso, foi demonstrado in vitro que os extratos de viscum podem neutralizar o efeito imunossupressor dos fatores das células tumorais nas células dendríticas  [236], o que pode sugerir um princípio básico de como as preparações de viscum podem atuar contra tumores por meio do sistema imunológico.

Durante a terapia com viscum, as células B ativadas por células dendríticas produzem anticorpos contra vários antígenos do extrato de viscum, como anticorpos ML e anticorpos de viscotoxina, etc. [232], que neutralizam parcialmente o efeito e, portanto, as reações locais podem diminuir ao longo da terapia constante com viscum [237].